尊龙凯时荧光定量PCR检测试剂盒
尊龙凯时推出的荧光定量PCR检测试剂盒,基于探针法原理精心开发,具备一系列显著优势,适用于生物医疗领域的多种检测需求。
产品特点
本产品具有以下主要特点:
- 即开即用:用户只需提供样品DNA模板,无需繁琐的前期准备,提升使用便利性。
- 灵敏度高:所有引物及相关组分经过优化,确保高灵敏度的检测结果。
- 阳性对照:提供阳性对照,有助于区分假阴性样品,提高实验的可靠性。
- 特异性强:引物依据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区设计,有效避免与其他生物样本DNA的交叉反应。
- 定性与定量兼具:适用于定性检测与定量检测,线性范围超过五个数量级,满足不同检测需求。
- 大容量:每盒可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 科研专用:本产品仅供科研使用,确保为实验室提供专业级别的服务。
使用方法
1. DNA提取
使用自选方法提取纯化样品DNA,本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容,保证样品处理的灵活性和可靠性。
2. 稀释标准曲线样品
由于阳性对照浓度较高,请在独立区域进行稀释操作,以防污染样品或试剂盒的其他成分。
- 标记6个离心管,标记为7、6、5、4、3、2。
- 分别加入45μL DEPC-H2O。
- 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照,充分震荡后,得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品,置于冰上待用。
- 以类似方式逐步稀释,直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品。再者,若不需要制作标准曲线,阳性对照可直接稀释至1×10E5拷贝/μL。
3. 试剂配制
根据待检测样品数量,准备对应数量的qPCR管,通常为N+2个,其中N为待检样品数量,1个阴性对照和6个阳性对照。向各PCR管中加入规定的反应成分,具体细节可参考详细说明书。
4. 添加模板
在qPCR管中分别加入2μL模板,按顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板及阳性对照,随后进行离心并立即开始扩增反应。
5. 扩增反应
将PCR管置于PCR扩增仪的样品槽中,进行 PCR 扩增,具体的扩增程序可参见详细说明书。
6. 结果分析
若制作标准曲线,则以阳性对照浓度的log值为X轴,Ct值为Y轴,绘制标准曲线,以待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。若未制作标准曲线,则根据以下标准判断结果:
- 阳性对照结果:Ct值<30,呈现明显的指数增长并形成典型的S型曲线。
- 阴性对照结果:Ct值为38或无Ct值,无明显的指数增长期与平台期。
- 样本检测结果:Ct值<35,显示出样品中检测出目标病原体,结果为阳性; Ct值>38表明样品中未检测到目标病原体; Ct值在35-38范围内应进行复检。
运输及保存
产品需低温运输,保存于-20℃,保存期限为一年。阳性对照需单独放置,避免染污染其他试剂,确保实验结果的准确性与可靠性。
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